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熒光免疫分析儀的技術(shù)原理

更新時(shí)間:2019-09-23點(diǎn)擊次數(shù):3618
熒光免疫分析儀的技術(shù)原理
熒光免疫檢測(cè)技術(shù)具有專(zhuān)一性強(qiáng)、靈敏度高、實(shí)用性好等優(yōu)點(diǎn),因此它被用于測(cè)量含量很低的生物活性化合物,例如蛋白質(zhì)(酶、接受體、抗體)、激素(甾族化合物、甲狀腺激素、酞激素)、藥物及微生物等。
原理
作為免疫分析法的一種,F(xiàn)IA同樣存在兩種模式,即競(jìng)爭(zhēng)型和夾心型。其中競(jìng)爭(zhēng)型(以標(biāo)記抗原的競(jìng)爭(zhēng)型為例)的測(cè)定原理是基于未標(biāo)記的抗原(Ag)和標(biāo)記抗原(Ag-L)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限的抗體(Ab)而實(shí)現(xiàn)的免疫分析法。檢測(cè)時(shí),Ab和Ag-L的濃度是固定的。當(dāng)未標(biāo)記的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后,Ag和Ab的結(jié)合使得Ag-L與Ab的免疫復(fù)合物的量減少。樣品中存在的Ag越多,Ab結(jié)合的Ag-L便越少,從Ab-Ag-L免疫復(fù)合物的減少或游離Ag-L的增加,可以定量測(cè)定出樣品中待測(cè)抗原的含量。其反應(yīng)過(guò)程如下:Ag+Ag-L+Ab≒(Ag:Ab)+(Ag-L:Ab)
對(duì)夾心型免疫分析來(lái)說(shuō),其反應(yīng)原理是在免疫反應(yīng)的載體上固定過(guò)量的Ab,然后加入一定量的Ag,免疫反應(yīng)后,再加入過(guò)量的標(biāo)記抗體(Ab-L),以形成“三明治”式夾心免疫復(fù)合物。樣品中存在的Ag越多,結(jié)合的Ab-L也越多,夾心免疫復(fù)合物的標(biāo)記熒光信號(hào)就越強(qiáng)。反應(yīng)過(guò)程如下:Ab+Ag≒Ab:Ag≒Ab:Ag:Ab-L。
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